Platforma Telight LiveCodim
LiveCodim to uniwersalna platforma do obrazowania o super wysokiej rozdzielczości, która została zaprojektowana do współpracy z dowolnym standardowym mikroskopem fluorescencyjnym. Jest to rozwiązanie do obrazowania na żywo w wysokiej rozdzielczości i przy zachowaniu niskiej fototoksyczności.
Platforma LiveCodim wykorzystuje nową metodę obrazowania w bardzo wysokiej rozdzielczości, która stanowi znakomite rozwiązanie dla badań w dziedzinie biologii komórek.
Dzięki wykorzystaniu rozwiązania firmy Telight, możliwe jest:
- utrzymanie integralności próbek biologicznych
- wykorzystanie wielu technik badawczych
- zachowanie niskiego kosztu posiadania
LiveCodim to uniwersalny dodatek do każdego standardowego mikroskopu fluorescencyjnego.
Obejmuje tryby szerokokątne, konfokalne i superrozdzielcze, aby zapewnić kompletne rozwiązanie, szczególnie odpowiednie do modernizacji.
Technologia opiera się na opatentowanej mikroskopii dyfrakcyjnej stożkowej (CODIM) — potężnym narzędziu do kształtowania wiązki, generującym kontrolowane i zlokalizowane wzorce światła używane do skanowania próbek biologicznych o bardzo niskiej fototoksyczności i znikomym fotowybielaniu.
Jak działa platforma LiveCodim
W 2006 roku Gabriel Y. Sirat wykazał, że dyfrakcja stożkowa może być wykorzystywana jako praktyczne narzędzie do kształtowania wiązek optycznych. Wtedy też powstała idea stworzenia wszechstronnego narzędzia do kształtowania wiązki i zastosowanie go w mikroskopii fluorescencyjnej o super rozdzielczości. Wykorzystując cienki, dwuosiowy kryształ, możliwe jest przekształcenie funkcji rozproszenia punktu (PSF) regularnej wiązki padającej i uzyskanie obszernej rodziny rozkładów światła. Wybór rozkładu jest kontrolowany przez polaryzację wejściową i wyjściową.
W praktyce, kształtowanie wiązki uzyskuje się poprzez umieszczenie dwuosiowego kryształu pomiędzy dwoma kontrolowanymi polaryzatorami. Ten prosty układ optyczny, podobny do polarymetru, umożliwia przełączanie wzorów (o innych topologiach) w ciągu mikrosekund – lub nawet szybciej. Ponadto, wzory te są doskonale współlokalizowane, ponieważ są wytwarzane przez tę samą pierwotną wiązkę optyczną.
Rodzina rozkładów przestrzennych, które mogą być generowane przez kryształ dwuosiowy i optykę polaryzacyjną. Górna oś pozioma wskazuje stan polaryzacji wejściowej, a oś pionowa wskazuje stan polaryzacji wyjściowej.
Układ do kształtowania wiązki, składa się z dwuosiowego kryształu, który jest umieszczony pomiędzy jednostkami polaryzacyjnymi, aby umożliwić manipulację zarówno polaryzacją wejściową, jak i wyjściową. W torze optycznym, przed kryształem, stosowany jest horyzontalny polaryzator liniowy i podwójne ogniwo Pockelsa, które działają jak generator polaryzacji (PSG). Pozwala to na generowanie dowolnej polaryzacji padającego światła. Za kryształem kolejna podwójna komórka Pockelsa z wertykalnym polaryzatorem liniowym, działa jak analizator polaryzacji (PSA).
Super rozdzielczość dzięki użyciu LiveCodim
Narzędzie do kształtowania wiązki CODIM jest używane jako dodatek do modułu konfokalnego, a rozkłady są skanowane na próbce, dając kilka mikroobrazów dla każdego punktu skanowania. Ze względu na geometrię skanowania punktowego, nasz system wytwarza zmniejszoną ilość światła rozproszonego w porównaniu z techniką opartą na szerokim polu.
System kształtowania wiązki CODIM generuje zwarte, zlokalizowane punkty świetlne w oparciu o zasadę dyfrakcji stożkowej. Każdy mikroobraz zawiera dużą liczbę wysokich częstotliwości, zbliżonych do limitu Abbego (aż do współczynnika bliskiego 3 w porównaniu do wzoru Airy’ego)
Zróżnicowane rozkłady światła, rzutowane na próbkę, są analizowane przy użyciu złożonych, opatentowanych algorytmów. Pozwala to na rekonstrukcję superrozdzielczego obrazu dla obiektów ogólnych z poprawą rozdzielczości nawet o współczynnik 2. Dodatkowo algorytmy te, pozwalają na jeszcze większą poprawę rozdzielczości dla odpowiednich próbek. .
Ostatecznie połączenie znacznie niższej mocy szczytowej dystrybucji, użycie kamery o wysokiej wydajności kwantowej i dłuższego czasu ekspozycji kamery, znacząco zmniejsza moc szczytową i energię światła wysyłanego do próbki. Dzięki temu, metoda ta charakteryzuje się bardzo niskim poziomem fotowybielania i zmniejszoną fototoksycznością. Pozwala to również uniknąć problemów z nasyceniem fluoroforami, co umożliwia pomiary liniowe i ilościowe.
Obserwacje z użyciem platformy LiveCodim
Krok 1
Ustaw parametry jak w przypadku regularnych obserwację na żywo w mikroskopie konfokalnym i zoptymalizuj ustawienia akwizycji obrazu.
Krok 2
Ustaw żądany obszar na środku pełnego pola widzenia i wykonaj 5-krotne powiększenie konfokalne.
Krok 3
Wybierz interesujący Cię region do zobrazowania w trybie super rozdzielczości i zdefiniuj ustawienia akwizycji CODIM.
Krok 4
Rozpocznij akwizycję w superrozdzielczości z wykorzystaniem algorytmów CODIM, a następnie potwierdź wynik.
Krok 5
Powtarzaj ten proces wielokrotnie, aby sprawdzić wiele obszarów.
Masz dodatkowe pytania lub wątpliwości?
Kluczowe zalety:
Wysokowydajne obrazowanie wielokolorowe w superrozdzielczości- 4 kanały fluorescencyjne
Obrazowanie komórek na żywo- niska fototoksyczność i niskie fotowybielanie umożliwiające badanie SR in vivo
Standardowy przebieg przygotowania próbek- jak dla mikroskopii fluorescencyjnej
Uproszczona i łatwa w użyciu aplikacja- autonomiczny algorytm przetwarzania bez konieczności dostosowywania wielu parametrów przez użytkownika
Rozdzielczość lepsza lub równa 120 nm XY- zwiększona rozdzielczość dzięki zmienionej procedurze skanowania punktów
Głębokie skanowanie- większa zdolność stosu Z i „tłumienie” sygnału z innych planów
Bezproblemowa integracja ze wszystkimi mikroskopami fluorescencyjnymi
Zastosowania:
